受血者有输血史、妊娠史或短期内需要大量输血时应按相关规定进行意外抗体的筛查和鉴定，以便及时发现有临床意义的意外抗体，从而避免输血反应的发生。

（一）概念

红细胞血型抗体分为规则抗体和不规则抗体，不规则抗体也称为意外抗体。规则抗体指ABO血型抗体，其产生符合Landsteiner法则，即红细胞表面有A或B抗原，血清中就会存在相应的抗-B或抗-A；意外抗体是指不符合ABO血型系统Landsteiner法则的血型抗体，即抗-A、抗-B之外的血型抗体，但部分ABO亚型出现的抗-A1等抗体，也称为意外抗体。它包括同种抗体和自身抗体，同种抗体是可与具有相应抗原的同种异基因红细胞发生凝集反应；自身抗体是指受血者免疫系统针对自身红细胞抗原产生的抗体，这类抗体不仅与自身红细胞凝集，也与多数异体红细胞发生凝集反应。

（二）意外抗体筛查方法

输血前对受血者血清/血浆进行抗体筛查，以发现具有临床意义的意外抗体。意外抗体可以是IgM类，也可以是IgG类。IgG类抗体主要是经输血或妊娠等免疫刺激产生，在盐水介质中不能凝集而只能致敏表达相应抗原的红细胞，必须通过特殊介质才能使致敏红细胞出现凝集反应。因此意外抗体检测的方法必须包括盐水介质法和特殊介质检测法；如白蛋白介质法、低离子强度介质法、酶技术、抗人球蛋白试验、聚凝胺促凝技术和微柱凝胶试验等。除盐水介质法以外，其他方法可按抗体的血清学特性和实验的具体条件选择其中一种。

1.盐水介质法

主要用于IgM类抗体筛查，该方法操作简单，成本低廉，但其灵敏度低，不易检测到弱凝集。

2.聚凝胺法

是一种非特异性促凝手段，在使用时应注意以下几点：

1. 聚凝胺试验阳性时，应设抗人球蛋白试验对照。

2. 多特异型抗球蛋白抗原阳性会引起聚凝胺试验假阳性。

3. 聚凝胺会增强温自身抗体反应，可用盐水试验或间接抗人球蛋白试验做对照。

3.抗人球蛋白试验

此法通过抗人球蛋白的桥联作用，能够使抗体致敏的红细胞发生凝集反应。抗人球蛋白试剂含有抗-IgG和抗-C3d。一些意外抗体，如Kidd系统血型特异性抗体能够激活补体，抗-C3d能与之结合。由于传统的抗人球蛋白试验操作繁琐、耗时长，且所需器材试剂复杂，很难在常规工作中普及。

4.酶介质法

蛋白水解酶能使红细胞表面某些隐蔽抗原暴露，增强其对某些抗体的检出率。但不足是对一些抗原起破坏作用，如M、N、S、Fy^a、Fy^b等，影响对这些抗体的检出。此法目前在临床已不常使用。

5.微柱凝胶法

该方法是凝胶层析分子排阻技术和免疫学抗原抗体特异性反应技术相结合的产物，通过调节凝胶的浓度来控制凝胶间隙的大小，其间隙只允许游离红细胞通过，从而使游离红细胞与凝集红细胞分离。该方法具有敏感性高、特异性强、结果准确、易于观察和影响因素少等特点，是目前临床最常用的抗体筛查方法之一。

6.意外抗体筛查注意事项

1. 抗体筛查结果全部阳性时，应进行“自身对照”，排除自身抗体干扰。

2. 抗体筛查可以在交叉配血试验之前或与交叉配血试验同时进行，以便尽早发现具有临床意义的抗体，避免输血反应的发生。

3. 抗体筛查试验结果阴性并不意味着血液中无意外抗体。某些抗体有剂量效应，因实验条件和所用谱细胞不足而造成漏检。

（三）抗体鉴定

抗体筛查试验结果阳性，应做抗体鉴定试验，以确定其特异性。

1.自身细胞检查

观察受血者血清与受血者自身细胞的反应情况，确定血清内是否有自身抗体或自身抗体和同种抗体两者同时存在。

2.谱细胞

抗体鉴定中使用的谱细胞在试验中占有十分重要的位置。谱细胞是通过严格筛选确定，已知血型表现型的8～12人份O型红细胞，对这些细胞的要求比抗体筛选细胞更严格。

谱细胞的功能必须具备能够检出常见抗体（如抗-D、抗-Jk^a、抗-E等）及某些罕见抗体，所以不仅要求涵盖常见且具有临床意义的抗原，还要保证这些抗原在一组谱细胞的分布特点，以便在检测相应抗体时会出现不同的反应格局。

另外，为了能从统计学上保证对抗体特异性的确认，每一种血型抗原最好在谱细胞上保持一定的阴性和阳性比例、使血清学检查的结果表现出客观规律性，而不是偶然的结果。一般用Fisher的正确估计概率的方法来计算各种阴性和阳性结合的可能性，1/20的P（可能性）值被认为是统计学上有效的、可以接受的值。

与谱细胞反应有明确结果，并且从反应格局可确定为单一抗体或无法确定为单一抗体时，可用排除法限定抗体特异性范围，并用吸收放散方法分离各种特异性抗体。当使用吸收放散法不能将抗体分离时，可考虑是联合抗体或类特异性抗体。

（四）抗体筛查和鉴定的影响因素

1.抗体筛查和鉴定细胞的质量

用于抗体筛查的试剂红细胞称筛查细胞。筛查细胞大多不包括低频率抗原，不能检出低频率抗原抗体。用于抗体鉴定的试剂红细胞称谱细胞，能鉴定大多数单一抗体和多种混合抗体，能区分复合抗体和混合抗体。细胞储存时，某些抗原变性，不能保证所有抗原阳性的细胞都与含有相应抗体的被检血清反应。由于人种的差异，对输血产生影响的意外抗体也有所不同，临床上很难找到完全覆盖所有抗原的筛查/鉴定细胞。因此在选择意外抗体筛查/鉴定细胞时，应符合本地区意外抗体分布的特点。

2.实验方法

凝集试验的反应条件、检测凝集的方法、增强剂（低离子介质、白蛋白、聚乙二醇）的使用，都会影响到凝集反应的强度。

IgM抗体在4℃时凝集强度明显大于室温，37℃会有减弱。抗人球蛋白试验的敏感性大于聚凝胺试验，酶技术对Rh、Kidd血型系统的检出效果最好，但对某些抗原的破坏性比较大，如M、N、S、Fy^a、Fy^b等，要考虑到可能造成的漏检。

3.抗体的特异性

1. 抗体筛查试验为阴性，并不意味着被检血清中一定没有意外抗体，要结合临床资料进行分析，防止低亲和力和低效价抗体的漏检。如怀疑为弱抗体引起的溶血性输血反应或新生儿溶血病时，需增加血清与红细胞的比例重复进行试验。

2. 筛查细胞漏检ABO亚型抗体（如抗-A₁），若被检血清中存在抗-A₁，可以通过正反定型不符提示。

3. 有些抗体（如抗-Le^a、抗-Jk^a）在盐水介质中可溶解抗原不配合的红细胞，出现溶血现象。

4. 应在标本采集48小时内完成试验，放置时间过久，可能造成抗体减弱导致漏检。对补体依赖性抗体的检测不适于用血浆标本。